محصولات
Lifecosm SARS-Cov-2-RT-PCR د 2019-nCoV لپاره کشف کټ
په تمه کارول
دا کټ د نوي کورونویرس (2019-nCoV) د کیفي کشف لپاره د ستوني سویبونو ، ناسوفرینجیل سویبونو ، برونکولوولر لیویج مایع ، بلغم په کارولو سره کارول کیږي. د دې محصول کشف پایله یوازې د کلینیکي حوالې لپاره ده ، او دا باید د یوازینۍ په توګه ونه کارول شي. د کلینیکي تشخیص او درملنې لپاره شواهد. د ناروغ د کلینیکي څرګندونو او نورو لابراتوار ازموینو سره په ترکیب کې د وضعیت هر اړخیز تحلیل وړاندیز کیږي.
د تفتیش اصول
دا کټ د یو مرحلې RT-PCR ټیکنالوژۍ پراساس دی.په حقیقت کې، د 2019 نوی کورونویرس (2019-nCoV) ORF1ab او N جینونه د لوړولو هدف سیمو په توګه غوره شوي.ځانګړي پرائمرونه او فلوروسینټ پروبونه (د N جین تحقیقات د FAM سره لیبل شوي او د ORF1ab تحقیقات د HEX سره لیبل شوي) په نمونو کې د 2019 نوي ډول کورونویرس RNA کشف کولو لپاره ډیزاین شوي.په کټ کې د داخلي کنټرول کشف سیسټم هم شامل دی (د داخلي کنټرول جین تحقیقات چې د CY5 سره لیبل شوی) د نمونو راټولولو پروسې نظارت کولو لپاره، RNA او PCR امپلیفیکیشن، په دې توګه غلط منفي پایلې کموي.
اصلي اجزا
| اجزا | حجم(48T/کټ) |
| د RT-PCR عکس العمل حل | 96µl |
| د nCOV پرائمر TaqMan پروبیمکسچر (ORF1ab، N جین، RnaseP جین) | 864µl |
| منفي کنټرول | 1500µl |
| nCOV مثبت کنټرول (l ORF1ab N Gene) | 1500µl |
خپل ریجنټونه: د RNA استخراج یا د پاکولو ریجنټونه.منفي/مثبت کنټرول: مثبت کنټرول RNA دی چې هدف ټوټه لري، پداسې حال کې چې منفي کنټرول د نیوکلیک اسید څخه پاک اوبه دي.د کارولو په جریان کې، دوی باید په استخراج کې برخه واخلي او باید ساري وګڼل شي.دوی باید د اړوندو مقرراتو سره سم اداره او له مینځه یوړل شي.
داخلي حوالې جین د انسان RnaseP جین دی.
د ذخیره کولو شرایط او د پای نیټه
-20 ± 5 ℃، د یخ کولو او له 5 څخه ډیر ځله د تکرار څخه ډډه وکړئ، د 6 میاشتو لپاره اعتبار لري.
د تطبیق وړ وسیله
د FAM / HEX / CY5 او نورو ملټي چینل فلوروسینټ PCR وسیلې سره.
د نمونې اړتیاوې
1. د تطبیق وړ نمونې ډولونه: د ستوني swabs، nasopharyngeal swabs، bronchoalveolar lavage مایع، sputum.
2. د نمونو راټولول (د ایسپټیک تخنیک)
د فارینجیل سویب: ټونسیلونه او د پورتنۍ فارینجیل دیوال په ورته وخت کې د دوه سویبونو سره پاک کړئ ، بیا د سویب سر په ټیسټ ټیوب کې ډوب کړئ چې د نمونې محلول لري
بلغم: وروسته له دې چې ناروغ ژور ټوخی ولري، ټوخی شوی بلغ په سکرو کیپ ټیسټ ټیوب کې راټول کړئ چې د نمونې محلول پکې شامل وي؛د برونکولوولر لیویج مایع: د طبي متخصصینو لخوا نمونه اخیستل.3.Storage او د نمونو ترانسپورت
د ویروس انزوا او RNA ازموینې نمونې باید ژر تر ژره معاینه شي.هغه نمونې چې په 24 ساعتونو کې کشف کیدی شي په 4℃ کې زیرمه کیدی شي؛هغه چې په 24 کې نشي موندل کیدی
ساعتونه باید په -70 ℃ یا لاندې زیرمه شي (که چیرې د -70 ℃ د ذخیره کولو شرایط شتون نلري، دوی باید
په موقتي توګه په -20 ℃ یخچال کې ساتل کیږي).نمونې باید د ترانسپورت په جریان کې د بار بار یخولو او پړسیدو څخه مخنیوی وشي.نمونې باید د راټولولو وروسته ژر تر ژره لابراتوار ته واستول شي.که چیرې نمونې په اوږد واټن کې لیږدولو ته اړتیا ولري، د وچې یخ ذخیره سپارښتنه کیږي.
د ازموینې میتودونه
1 د نمونې پروسس او RNA استخراج (د نمونې پروسس ساحه)
دا سپارښتنه کیږي چې د RNA استخراج لپاره 200μl مایع نمونه واخلئ.د استخراج اړوندو مرحلو لپاره، د تجارتي RNA استخراج کټونو لارښوونو ته مراجعه وکړئ.دواړه منفي او منفي
په دې کټ کې کنټرولونه په استخراج کې ښکیل وو.
2 د PCR ریجنټ چمتو کول (د ریجنټ چمتو کولو ساحه)
2.1 ټول اجزا له کټ څخه لرې کړئ او د خونې په حرارت کې یې وخورئ او مخلوط کړئ.سنټرفیوج په 8,000 rpm کې د څو ثانیو لپاره د کارولو دمخه؛د ریجنټونو اړین مقدار محاسبه کړئ، او د عکس العمل سیسټم چمتو شوی لکه څنګه چې په لاندې جدول کې ښودل شوي:
| اجزا | N خدمت کول (25µl سیسټم) |
| nCOV پرائمر TaqMan probemixture | 18 µl × N |
| د RT-PCR عکس العمل حل | 2 µl × N |
| *N = د ازمویل شوي نمونو شمیر + 1 (منفي کنټرول) + 1 (nCOVمثبت کنټرول) | |
2.2 د اجزاو په بشپړه توګه مخلوط کولو وروسته، د لنډ وخت لپاره سینټرفیوج کړئ ترڅو د ټیوب دیوال ټول مایع د ټیوب لاندې ښکته شي، او بیا د PCR ټیوب ته د 20 μl امپلیفیکیشن سیسټم الیکوټ کړئ.
3 نمونه اخیستل (د نمونې چمتو کولو ساحه)
د استخراج وروسته د منفي او مثبت کنټرول 5μl اضافه کړئ.د نمونې RNA د ازموینې لپاره د PCR عکس العمل ټیوب کې اضافه کیږي.
ټیوب په کلک ډول کیپ کړئ او د څو ثانیو لپاره په 8,000 rpm کې سینټرفیوج مخکې له دې چې د امپلیفیکیشن کشف ساحې ته یې انتقال کړئ.
4 د PCR پراخول (د کشف ساحه پراخه شوې)
4.1 د عکس العمل ټیوب د آلې په نمونه حجره کې ځای په ځای کړئ او پیرامیټونه په لاندې ډول تنظیم کړئ:
| مرحله | سایکل شمیره | د حرارت درجه(°C) | وخت | ټولګهسایټ |
| بیرتهنقل | 1 | 42 | ۱۰ دقیقې | - |
| مخکی له دی چیn | 1 | 95 | ۱ دقیقه | - |
| سایکل | 45 | 95 | 15s | - |
| 60 | 30s | د معلوماتو راټولول |
د وسیله کشف کولو چینل انتخاب: د فلوروسینس سیګنال لپاره FAM、HEX、CY5 چینل غوره کړئ.د حوالې فلوروسینټ NONE لپاره، مهرباني وکړئ ROX مه غوره کړئ.
5 د پایلو تحلیل (مهرباني وکړئ د ترتیب لپاره د هرې وسیلې تجربوي لارښوونو ته مراجعه وکړئ)
د غبرګون وروسته، پایلې خوندي کړئ.د تحلیل وروسته، د پیل ارزښت، پای ارزښت، او د انځور سره سم د بیس لاین حد ارزښت تنظیم کړئ (کاروونکی کولی شي د حقیقي وضعیت سره سم تنظیم کړي، د پیل ارزښت 3 ~ 15 ته ټاکل کیدی شي، د پای ارزښت ټاکل کیدی شي. 5~20، تعدیل) په لوګاریتمیک ګراف کې د کړکۍ په حد کې، د حد کرښه د لوګاریتمیک پړاو کې ده، او د منفي کنټرول د پراخولو منحنی مستقیم کرښه یا د حد څخه ښکته ده).
6 د کیفیت کنټرول (یو طرزالعمل کنټرول په ازموینه کې شامل دی) منفي کنټرول: د FAM، HEX، CY5 کشف چینلونو لپاره هیڅ څرګند پراخیدونکي وکر نشته
د COV مثبت کنټرول: د FAM او HEX کشفي چینلونو واضح امپلیفیکیشن وکر، د Ct value≤32، مګر د CY5 چینل پراخیدونکي وکر نشته؛
پورته اړتیاوې باید په ورته تجربه کې په ورته وخت کې پوره شي؛که نه نو، تجربه باطله ده او باید تکرار شي.
7 د پایلو معلومول.
7.1 که چیرې د ازموینې نمونې په FAM او HEX چینلونو کې د امپلیفیکیشن وکر یا Ct ارزښت> 40 شتون ونلري ، او په CY5 چینل کې د امپلیفیکیشن وکر شتون ولري ، نو دا قضاوت کیدی شي چې د 2019 نوی کورونویرس شتون نلري (2019-nCoV) په نمونه کې RNA؛
.2 که چیرې د ازموینې نمونه په FAM او HEX چینلونو کې څرګند امپلیفیکیشن منحني ولري، او د Ct ارزښت ≤40 وي، نو دا قضاوت کیدی شي چې نمونه د 2019 نوي کورونویرس (2019-nCoV) لپاره مثبته ده.
7.3 که چیرې د ازموینې نمونه یوازې د FAM یا HEX په یو چینل کې روښانه امپلیفیکیشن وکر ولري، او د Ct ارزښت ≤40 وي، او په بل چینل کې د امپلیفیکیشن وکر شتون نلري، پایلې باید بیا ازموینه وشي.که د بیاکتنې پایلې مطابقت ولري، نمونه د نوي لپاره مثبته قضاوت کیدی شي
کوروناویرس 2019 (2019-nCoV).که د بیاکتنې پایله منفي وي، نو دا قضاوت کیدی شي چې نمونه د 2019 نوي کورونویرس (2019-nCoV) لپاره منفي ده.
د مثبت قضاوت ارزښت
د ROC منحنی میتود د کټ د حوالې CT ارزښت ټاکلو لپاره کارول کیږي او د داخلي کنټرول حواله ارزښت 40 دی.
د ازموینې پایلو تفسیر
1. هره تجربه باید د منفي او مثبت کنټرول لپاره و ازمول شي.د ازموینې پایلې یوازې هغه وخت ټاکل کیدی شي کله چې کنټرول د کیفیت کنټرول اړتیاوې پوره کړي
2. کله چې د FAM او HEX کشف چینلونه مثبت وي، د CY5 چینل (داخلي کنټرول چینل) پایله ممکن د سیسټم سیالۍ له امله منفي وي.
3. کله چې د داخلي کنټرول پایله منفي وي، که چیرې د ټیسټ ټیوب د FAM او HEX کشف چینلونه هم منفي وي، نو دا پدې مانا ده چې سیسټم غیر فعال دی یا عملیات غلط دي، ازموینه باطله ده.له همدې امله، نمونې باید بیا معاینه شي.
