محصولات
د 2019-nCoV لپاره د لایف کاسم SARS-Cov-2-RT-PCR کشف کټ
تمه شوې کارول
دا کټ د نوي کورونا ویروس (2019-nCoV) د کیفي کشف لپاره د ستوني سویبونو، ناسوفرینجیل سویبونو، برونکوالویولر لاویج مایع، بلغم په کارولو سره کارول کیږي. د دې محصول د کشف پایله یوازې د کلینیکي حوالې لپاره ده، او دا باید د کلینیکي تشخیص او درملنې لپاره د یوازینۍ شواهدو په توګه ونه کارول شي. د ناروغ د کلینیکي څرګندونو او نورو لابراتوار ازموینو سره په ګډه د حالت جامع تحلیل سپارښتنه کیږي.
د تفتیش اصل
دا کټ د یو ګام RT-PCR ټیکنالوژۍ پر بنسټ جوړ شوی دی. په حقیقت کې، د ۲۰۱۹ کال نوی کورونا ویروس (۲۰۱۹-nCoV) ORF1ab او N جینونه د امپلیفیکیشن هدف سیمو په توګه غوره شوي وو. ځانګړي پرائمرونه او فلوروسینټ پروبونه (د N جین پروبونه د FAM سره لیبل شوي او ORF1ab پروبونه د HEX سره لیبل شوي) د نمونو کې د ۲۰۱۹ نوي ډول کورونویرس RNA کشف کولو لپاره ډیزاین شوي دي. په کټ کې د داخلي داخلي کنټرول کشف سیسټم (د CY5 سره لیبل شوی داخلي کنټرول جین پروب) هم شامل دی ترڅو د نمونې راټولولو، RNA او PCR امپلیفیکیشن پروسې څارنه وکړي، په دې توګه غلط منفي پایلې کموي.
اصلي برخې
| اجزا | حجم(۴۸ ټنه/کټ) |
| د RT-PCR غبرګون حل | ۹۶ µl |
| د nCOV پرائمر TaqMan پروبیمکسچر (ORF1ab، N جین، RnaseP جین) | ۸۶۴ µl |
| منفي کنټرول | ۱۵۰۰ μl |
| nCOV مثبت کنټرول (l ORF1ab N Gene) | ۱۵۰۰ μl |
خپل ریجنټونه: د RNA استخراج یا د پاکولو ریجنټونه. منفي/مثبت کنټرول: مثبت کنټرول RNA دی چې د هدف ټوټه لري، پداسې حال کې چې منفي کنټرول د نیوکلیک اسید څخه پاک اوبه دي. د کارولو پرمهال، دوی باید په استخراج کې برخه واخلي او باید ساري وګڼل شي. دوی باید د اړوندو مقرراتو سره سم اداره او له منځه یوړل شي.
داخلي حوالې جین د انسان RnaseP جین دی.
د ذخیره کولو شرایط او د ختمیدو نیټه
-20±5℃، د 5 ځله څخه زیات د یخولو او ویلو څخه ډډه وکړئ، د 6 میاشتو لپاره اعتبار لري.
د تطبیق وړ وسیله
د FAM / HEX / CY5 او نورو څو چینل فلوروسینټ PCR وسیلو سره.
د نمونې اړتیاوې
۱. د تطبیق وړ نمونې ډولونه: د ستوني سوابونه، د ناسوفرینجیل سوابونه، د برونکوالویولر لاویج مایع، بلغم.
۲. د نمونې راټولول (د تعقیم تخنیک)
د ستوني د غاړې سواب: د ټونزیل او د ستوني د غاړې دیوال په ورته وخت کې د دوو سوابونو سره پاک کړئ، بیا د سواب سر په یوه ټیسټ ټیوب کې ډوب کړئ چې د نمونې اخیستلو محلول لري.
بلغم: وروسته له دې چې ناروغ ژور ټوخی وکړي، ټوخی شوی بلغم په یوه سکرو کیپ ټیسټ ټیوب کې راټول کړئ چې د نمونې اخیستلو محلول پکې وي؛ د برونکوالویولر لاویج مایع: د طبي متخصصینو لخوا نمونه اخیستل. ۳. د نمونو ذخیره کول او لیږد
د ویروس جلا کولو او RNA ازموینې لپاره نمونې باید ژر تر ژره و ازمول شي. هغه نمونې چې په 24 ساعتونو کې کشف کیدی شي په 4 ℃ کې زیرمه کیدی شي؛ هغه چې په 24 ساعتونو کې نشي کشف کیدی
ساعتونه باید په -70 ℃ یا لاندې کې زیرمه شي (که چیرې د -70 ℃ د ذخیره کولو حالت شتون ونلري، دوی باید وي
په لنډمهاله توګه په -20 درجو یخچال کې ساتل کیږي). نمونې باید د لیږد پرمهال د تکرار کنګل کیدو او ویلې کیدو څخه مخنیوی وشي. نمونې باید د راټولولو وروسته ژر تر ژره لابراتوار ته واستول شي. که چیرې نمونې د اوږد واټن څخه لیږدولو ته اړتیا ولري، د وچې یخ ذخیره کولو سپارښتنه کیږي.
د ازموینې طریقې
۱ د نمونې پروسس او د RNA استخراج (د نمونې پروسس ساحه)
د RNA استخراج لپاره د 200μl مایع نمونې اخیستلو سپارښتنه کیږي. د اړوندو استخراج مرحلو لپاره، د سوداګریزو RNA استخراج کټونو لارښوونو ته مراجعه وکړئ. منفي او منفي دواړه
په دې کټ کې کنټرولونه په استخراج کې ښکیل وو.
۲ د PCR ریجنټ چمتو کول (ریجنټ چمتو کولو ساحه)
۲.۱ ټول اجزا له کټ څخه وباسئ او د خونې په تودوخه کې یې وچ کړئ او مخلوط کړئ. د کارولو دمخه د څو ثانیو لپاره په ۸۰۰۰ rpm کې سنټرفیوج؛ د ریجنټونو اړین مقدار محاسبه کړئ، او د عکس العمل سیسټم چمتو کیږي لکه څنګه چې په لاندې جدول کې ښودل شوي:
| اجزا | د نایتروجن سرونګ (۲۵µl سیسټم) |
| nCOV پرائمر TaqMan probemixture | ۱۸ μl × ن |
| د RT-PCR غبرګون حل | ۲ μl × ن |
| *N = د ازمول شویو نمونو شمیر + 1 (منفي کنټرول) + 1 (nCOV)مثبت کنټرول) | |
۲.۲ د اجزاو په بشپړه توګه مخلوط کولو وروسته، د لنډ وخت لپاره سنټرفیوج وکړئ ترڅو د ټیوب په دیوال کې ټول مایع د ټیوب لاندې ته راښکته شي، او بیا د 20 µl امپلیفیکیشن سیسټم د PCR ټیوب ته واړوئ.
۳ نمونه اخیستل (د نمونې چمتو کولو ساحه)
د استخراج وروسته د منفي او مثبت کنټرولونو 5μl اضافه کړئ. د نمونې RNA چې ازموینه کیږي د PCR غبرګون ټیوب ته اضافه کیږي.
ټیوب په کلکه وتړئ او د څو ثانیو لپاره په 8,000 rpm کې سنټرفیوج کړئ مخکې لدې چې د امپلیفیکیشن کشف ساحې ته یې انتقال کړئ.
۴ د PCR امپلیفیکیشن (د کشف ساحه پراخه شوې)
۴.۱ د غبرګون ټیوب د وسیلې په نمونې حجره کې ځای په ځای کړئ، او پیرامیټرونه په لاندې ډول تنظیم کړئ:
| مرحله | سایکل شمېره | د حرارت درجه(°C) | وخت | ټولګهسایټ |
| برعکسنقل کول | 1 | 42 | ۱۰ دقیقې | - |
| د ډینیټوریشن څخه مخکېn | 1 | 95 | ۱ دقیقې | - |
| سایکل | 45 | 95 | ۱۵ کاله | - |
| 60 | ۳۰ لسیزه | د معلوماتو راټولول |
د وسایلو د کشف چینل انتخاب: د فلوروسینس سیګنال لپاره د FAM、HEX、CY5 چینل غوره کړئ. د فلوروسینټ هیڅ نه حوالې لپاره، مهرباني وکړئ ROX مه غوره کوئ.
۵ د پایلو تحلیل (مهرباني وکړئ د تنظیم کولو لپاره د هرې وسیلې تجربوي لارښوونو ته مراجعه وکړئ)
د غبرګون وروسته، پایلې خوندي کړئ. د تحلیل وروسته، د پیل ارزښت، پای ارزښت، او د بیس لاین د حد ارزښت د انځور سره سم تنظیم کړئ (کاروونکی کولی شي د حقیقي وضعیت سره سم تنظیم کړي، د پیل ارزښت 3 ~ 15 ته تنظیم کیدی شي، د پای ارزښت 5 ~ 20 ته تنظیم کیدی شي، تنظیم کول) په لوګاریتمیک ګراف کې د کړکۍ په حد کې، د حد کرښه د لوګاریتمیک مرحله کې ده، او د منفي کنټرول د امپلیفیکیشن وکر مستقیم کرښه یا د حد لاین لاندې ده).
۶ د کیفیت کنټرول (یو طرزالعمل کنټرول په ازموینه کې شامل دی) منفي کنټرول: د FAM، HEX، CY5 کشف چینلونو لپاره هیڅ څرګند امپلیفیکیشن وکر نشته n
د COV مثبت کنټرول: د FAM او HEX کشف چینلونو څرګند امپلیفیکیشن وکر، د Ct ارزښت ≤32، مګر د CY5 چینل هیڅ امپلیفیکیشن وکر نشته؛
پورته اړتیاوې باید په ورته تجربه کې په ورته وخت کې پوره شي؛ که نه نو، تجربه باطله ده او باید تکرار شي.
۷ د پایلو ټاکل.
۷.۱ که چیرې د ازموینې نمونې په FAM او HEX چینلونو کې د امپلیفیکیشن منحنی یا Ct ارزښت> ۴۰ شتون ونلري، او د CY5 چینل کې د امپلیفیکیشن منحنی شتون ولري، نو دا قضاوت کیدی شي چې په نمونه کې د ۲۰۱۹ نوي کورونویرس (۲۰۱۹-nCoV) RNA شتون نلري؛
.2 که چیرې د ازموینې نمونه په FAM او HEX چینلونو کې څرګند امپلیفیکیشن منحني ولري، او د Ct ارزښت ≤40 وي، نو دا قضاوت کیدی شي چې نمونه د 2019 نوي کورونویرس (2019-nCoV) لپاره مثبته ده.
۷.۳ که چیرې د ازموینې نمونه یوازې د FAM یا HEX په یوه چینل کې روښانه امپلیفیکیشن منحنی ولري، او د Ct ارزښت ≤40 وي، او په بل چینل کې هیڅ امپلیفیکیشن منحنی شتون ونلري، نو پایلې باید بیا ازموینه شي. که چیرې د بیا ازموینې پایلې یو شان وي، نو نمونه د نوي لپاره مثبته ګڼل کیدی شي.
کورونا ویروس ۲۰۱۹ (۲۰۱۹-nCoV). که د بیا ازموینې پایله منفي وي، نو دا قضاوت کیدی شي چې نمونه د ۲۰۱۹ نوي کورونویرس (۲۰۱۹-nCoV) لپاره منفي ده.
د مثبت قضاوت ارزښت
د ROC منحني میتود د کټ د حوالې CT ارزښت ټاکلو لپاره کارول کیږي او د داخلي کنټرول حوالې ارزښت 40 دی.
د ازموینې پایلو تفسیر
۱. هره تجربه باید د منفي او مثبت کنټرولونو لپاره و ازمول شي. د ازموینې پایلې یوازې هغه وخت ټاکل کیدی شي کله چې کنټرولونه د کیفیت کنټرول اړتیاوې پوره کړي.
۲. کله چې د FAM او HEX کشف چینلونه مثبت وي، د CY5 چینل (داخلي کنټرول چینل) پایله ممکن د سیسټم سیالۍ له امله منفي وي.
۳. کله چې د داخلي کنټرول پایله منفي وي، که چیرې د ټیسټ ټیوب FAM او HEX کشف چینلونه هم منفي وي، نو دا پدې مانا ده چې سیسټم غیر فعال دی یا عملیات غلط دي، نو ازموینه باطله ده. له همدې امله، نمونې باید بیا ازموینه شي.
